昆虫糖原(Glycogen)酶联免疫(ELISA)试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用，不得用于临床诊断 规格：48T/96T
实验目的：
本试剂盒用于测定昆虫相关液体样本中糖原(Glycogen)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中昆虫糖原(Glycogen)水平。用纯化的昆虫糖原(Glycogen)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入糖原(Glycogen)，再与HRP标记的糖原(Glycogen)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的糖原(Glycogen)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中昆虫糖原(Glycogen)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：64 mg/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：32、16 、8 、4 、2 mg/L.
样本处理及要求：
1、对于样本要求保持鲜重
2、称取样本中的重量不小于50mg，一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。
3、匀浆的比例选取10%，相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。
4、匀浆液选取PBS（PH=7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）
5、匀浆过程选用组织匀浆器，冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨)离心取上清，离心转速选用5000转 每分，时间是15分钟。取上清液待检！
需自备的仪器耗材：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
操作步骤：
1、加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50μl不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50μl蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6、温育：操作同2。
7、洗涤：操作同4。
8、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.98以上。
2. 批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。
检测范围：
0.5 mg/L – 35 mg/L
灵敏度：
最低检测浓度小于0.1 mg/L
保存条件及有效期：
1. 试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期： 6个月
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡30分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5. 本试剂不同批号组分不得混用，底物请避光保存。
6. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
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